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丈量健康 质谱华章(二)--GBS检测专题




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       导读: 6月15日-17日,中国检验医学界一年一度的学术盛会——“2017中国医师协会检验医师年会暨第十二届全国检验与临床学术会议”在西安曲江国际会议中心隆重举行。会议邀请了国内外知名专家学者,共同探索检验医学发展方向,为临床检验工作者、医院管理者以及检验专家获得新技术、新方法、新理念提供了重要平台。



       [ 大会报告:GBS检测专题 ]


       质谱技术已成为继分子生物学后推动临床检验发展的重要技术。为更好地推动质谱技术在临床检验中的应用,6月16日中午的飞行时间质谱专题卫星会,着力于围绕质谱技术的前沿应用,囊括质谱平台临床应用的多个方面。其中,来自北京大学深圳医院的刘小平主任就我国现行极为重视的优生优育问题和产前微生物检测方向做了精彩的报告,报告题目为“晚孕妇女阴道分泌物B群链球菌筛查及质谱检测”。       


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       刘主任首先就B族链球菌(GBS)对新生儿的感染部位、感染途径以及症状做了概述性的讲解。随后,刘主任从流行病学、孕妇携带率及危害等角度逐渐展开对GBS的介绍。GBS首次被报告于1938年,为产褥期败血症病原菌。1970年才被临床医生重视,目前 GBS已被证实为围产期母婴感染的主要致病菌之一,是婴幼儿败血症、肺炎和脑膜炎最常见的原因。         


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       然而,10%-30%孕妇的阴道和直肠定植GBS,大多数情况下无症状。但2%-4%孕妇发生GBS尿路感染,亦有极少数孕妇在怀孕期间发生胎膜早破、羊膜炎、子宫内膜炎、产褥感染、早产、败血症等。同时,当妊娠期妇女有肥胖、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、多次妊娠、低龄或高龄等危险因素时,则更容易感染GBS。同时,母亲携带的B族链球菌极易传染给新生儿,可以是出生前的逆行感染,也可以是分娩过程中羊水吸入,引发新生儿肺炎、脑膜炎、败血症,导致耳聋、视力受损、发育障碍、脑瘫等后遗症。GBS对新生儿的感染根据发病时间可分为早发型和晚发型,早发型占新生儿GBS感染的80%,一般在出生后6-12小时发病,尤其是早产儿,主要通过母婴垂直传播,其临床表现为肺炎和败血症;而晚发型占新生儿GBS感染的20%,多在出生5天到7周之内,这类患儿会通过水平和垂直两种方式传播,其临床表现为脑膜炎。     

 

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       目前,B链的检测可通过直接染色进行革兰氏镜检,除此之外还可进行分离培养找出标准菌落,再通过免疫、乳胶凝集试验、质谱等不同的鉴定方法对GBS进行检测并得出报告。


       传统检验方法在GBS感染性疾病诊断方面面临着样本流转时间 (turn- around-time,简称TAT) 长等重大问题,尽管市面上已有大量自动检测方法,但大多还是基于微生物生物化学反应原理,虽能缩短TAT,但仍不能实现真正的快速鉴定。PCR检测步骤复杂,技术操作要求高,检测需要时间相对较长,切易出现假阳性的现象。而MALDI-ToF检测B族链球菌会大大缩短检测时间,无需冗长步骤,具有很大优势。           

   

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       刘主任的团队在北大深圳医院连续收集了产检门诊孕35-37周女性阴道分泌物拭子。进行细菌分离培养鉴定,再利用MALDI-ToF技术进行检测验证。其中,在2016年收集到的120株B群链球菌,通过Clin-ToF II(北京毅新博创生物科技有限公司生产)质谱分析结果,Clin-ToF微生物快速检测平台通过分析和比对微生物的16s核糖体蛋白指纹图谱,仅需要2小时左右便可快速准确检测出GBS,相比基于生化方法的检测方法节省了大量时间和耗材,其结果与生化鉴定结果符合率100%。实际检测过程如下所示。



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       鉴定报告后,通过使用抗生素可对GBS感染进行预防治疗,根据美国CDC 《围产期GBS预防指南》中的介绍,许多GBS菌株具有耐药性,如侵袭性GBS疾病的许多菌株对克林霉素或红霉素有抗药性。因此,需对GBS不同菌株进行药敏测试,结果选用相应的抗生素对围产期孕妇进行预防或治疗。


       综上所述,GBS在孕妇和新生儿疾病筛查中至关重要,然而B群链球菌的鉴定手段将不限于生化鉴定,质谱作为一种新出现的分析手段会广泛用于菌株鉴定并对实验的验证起到快速准确的作用。同时,乳胶凝集试验是有用的筛查试验,而如何正确使用抗生素对GBS感染进行预防和治疗也成为现行关注的重要课题。